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新生大鼠皮層來源的小膠質細胞分離和培養
發布時間： 2025-07-23 點擊次數： 1023次小膠質細胞大約占哺乳動物大腦細胞總數的12%，通過吞噬腦組織中的碎片和病原體來維持腦實質的穩態，在正常的腦生理學中發揮著重要作用。
一、解剖新生大鼠腦組織
1. 用溫熱的生理鹽水擦拭P2天的新生鼠；
2. 用70%乙醇沖洗P2新生鼠；
3. 從頭部取出整個大腦，放入裝有L-15溶液的培養皿中；
4. 移除腦膜，轉移皮層到裝有L-15溶液的培養皿中。
二、制備混合膠質細胞群
1. 清洗所有P2新生鼠的大腦皮層；
2. 把大腦皮層剪成小塊；
3. 加入新鮮的DMEMwan全培養基4-5ml，吹打10-15次；
4. 用100um的濾器過濾；
5. 離心2500RCF/5min/4℃。
三、種植混合膠質細胞群
1. 一個P2新生鼠的大腦皮層混合細胞群種到一個T-75培養瓶中；
2. 第5天，全量換液，之后每3天全量換液。
四、原代小膠質細胞的分離和培養
1. 2-3周，當混合的細胞群長滿T-75培養瓶底；
2. 在37℃以150rps的速度搖動T-75培養瓶2小時;
3. 用移液管從所有T-75培養瓶中收集培養基，不要破壞培養瓶表面的星形膠質細胞層；
4. 離心2500RCF/5min/4℃；
5. 吸取上清液，將沉淀重懸于1 ml小膠質細胞培養基中；
6. 計數；
7. 種植小膠質細胞。
8. 在培養箱中培養。
五、代表性結果
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