軟瓊脂克隆:克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀
實驗步驟
1.獲取樣本，培養細胞，
2.調整細胞懸液密度為1x103個/ml細胞。
3.制備底層瓊脂，*溶化的5%瓊脂和37*C左右預溫的新鮮*培養液以1: 9比例在40^C均勻混合，加入培養皿(直
徑60mm)中，每皿含0.5%瓊脂培養基2ml,室溫下瓊脂*凝固。
4.制備上層瓊脂,37C密度每皿含200個的細胞懸液1.5m移入小燒杯中，加入40C、5%瓊脂等體積混勻，即成0.25%半固
體瓊脂培養基。配好的半固體瓊脂培養基立即加入鋪有底層瓊脂的培養皿中，室溫下瓊脂凝固。37C、5%CO2靜置培養2-
3周。
5.當培養皿中出現肉眼可見克隆時，終止培養，棄去培養液，PBS液小心浸洗2次，空氣干燥。甲醇固定15分鐘，棄甲醇后
空氣干燥。用Giemsa染液染色10分鐘，流水緩慢洗去染液，空氣干燥。
實驗周期及交付標準
1.實驗周期: 1-2周
2.交付標準:克隆形成圖片、計數結果、柱狀圖、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)
細胞包克隆化其他方法
1.稀釋鋪板方法
2.飼養層克隆法
3.毛細管克隆法
4.熒光激活分選法
